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小鼠原代肝细胞实验的原理、所需材料和实操步骤 当前位置: 首页 > 新闻中心 > 小鼠原代肝细胞实验的原理、所需材料和实操步骤

小鼠原代肝细胞实验的方法原理

将小鼠原代肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。

小鼠原代肝细胞实验所需材料

小鼠、试剂、试剂盒、DMEM无血清DMEM培养基胰酶PBS仪器、耗材、饭盒、纱布、剪子、镊子、烧杯、平皿研磨玻片、滤网、离心管、6孔培养板、吸管移液管、手套、微量加样器等

小鼠原代肝细胞实验操作步骤

一、实验材料准备

1.  动物:小鼠。
2.  试剂:DMEM(含血清)、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS。
3.   器械:饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管(15/50 ml)、6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器。
4.  准备:酒精擦拭台面后把物品摆放好,开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束。

二、方法
1.将小鼠断颈致死,置75%酒精泡2-3秒钟,取肝脏,置于盛有PBS的平皿中。
2.剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物,转移到另一个盛有PBS液的平皿中。
3.用手术剪将脏器剪成小块(大小约1mm2),玻片研磨,转到离心管,离心(1 000 rpm,5 min)。
4.视组织或小鼠原代肝细胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶,37℃中消化20分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离。
5.加入3-5 ml含血清的培养液以中止胰酶消化作用。
6.用100目孔径滤网滤过,除去未消化的大组织块。
7.再次离心5 min,弃上清液。
8.加入无血清培养液5 ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。
9.加入含血清的培养液1-2 ml(视细胞量),血球计数板计数。
10.将小鼠原代肝细胞调整到5×105/ml左右,转移至6孔培养板中,37℃下培养


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